雙波長(cháng)分光光度法的基本原理及應用

應用分光光度法對共存組分進(jìn)行不分離定量測定時(shí)，通常采用的方法有雙波長(cháng)法，三波長(cháng)法，導數光譜法、差譜分析法及多組分分析法等方法，其快速，簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)使這些方法在實(shí)用分析中得到越來(lái)越廣泛的應用。其中以雙波長(cháng)法的應用為zui多，該法的準確度和精密度要高于其它方法，是對共存組分不分離定量測定的有效方法之一。

實(shí)用中的雙波長(cháng)法主要采用等吸收波長(cháng)法和系數倍增法兩種分析方法，下面就其基本原理和應用作以介紹：

一、等吸收波長(cháng)法

1、基本原理

圖1是同一組分三個(gè)不同濃度供試液的吸收光譜圖，經(jīng)典分光光度法的定量測定通常是在被測組分的zui大吸收波長(cháng)處進(jìn)行測定，根據蘭伯一比耳定律，其吸光度值與被測組分的濃度C成正比，即：

依（3）式測定被測組分a，則可*消除b組分的干擾，達到共存組分不分離進(jìn)行定量測定的目的。

2、影響因素

（1）測定波長(cháng)和組合波長(cháng)的選擇應使被測組分的△A值盡可能大，以增加測定的靈敏度和度。

（2）測定波長(cháng)和組合波長(cháng)應盡可能選擇在光譜曲線(xiàn)斜率變化較小的波長(cháng)處，以減小波長(cháng)變化對測定結果的影響。

（3）干擾組分等吸收波長(cháng)（組合波長(cháng)）的選擇必須，只有其△A值等于零時(shí)才能*消除干擾，否則會(huì )引入測定誤差。為此，在實(shí)用分析中，都是先配制一個(gè)干擾組分b的供試液，在儀器上準確找出等吸收波長(cháng) ，然后再對樣品進(jìn)行測定。

3 應用實(shí)例

等吸收波長(cháng)法的一個(gè)典型應用實(shí)例為收載于《中華人民共和國藥典》中的抗菌消炎藥復方磺胺甲噁唑片的含量測定。復方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑（SMZ）和甲氧芐（TMP）兩個(gè)成分，其吸收光譜見(jiàn)圖3。

當測定SMZ時(shí)，選擇其zui大吸收波長(cháng)257nm為測定波長(cháng)，可以在干擾組分TMP的光譜曲線(xiàn)上304nm附近找到等吸收波長(cháng)為組合波長(cháng)消除其干擾；當測定TMP時(shí)，選擇239nm為測定波長(cháng)，可以在干擾組分SMZ的光譜曲線(xiàn)上295nm附近找到等吸收波長(cháng)為組合波長(cháng)消除其干擾，分別對SMZ和TMP進(jìn)行含量測定。

二、系數倍增法

1 基本原理

當測定被測組分時(shí)，并非都能在干擾組分的光譜曲線(xiàn)上找到等吸收波長(cháng)（見(jiàn)圖4），這時(shí)，如果能在干擾組分b的光譜曲線(xiàn)上找到對應于被測組分a光譜曲線(xiàn)無(wú)吸收的組合波長(cháng)

λ2，即可采用系數倍增法進(jìn)行測定。

設被測組分的測定波長(cháng)為λ1，在此波長(cháng)處被測組分a和干擾組分b均有吸收，在組合波長(cháng)λ2處，被測組分a無(wú)吸收而干擾組分b有吸收，用干擾組分b的對照品在λ1和λ2波長(cháng)處測定吸光度，其比值為一常數K，可按下式計算，求得被測組分的吸光度值，再計算其含量。

2 影響因素

（1）測定波長(cháng)與組合波長(cháng)應盡可能選擇在光譜曲線(xiàn)斜變化較小的波長(cháng)處，以減小波長(cháng)變化對測定結果的影響。

（2）組合波長(cháng)λ2必須選擇在被測組分無(wú)吸收干擾組分有吸收的波長(cháng)處，這時(shí)共存組分在組合波長(cháng)λ2處測得的吸光度值為干擾組分的凈吸光度值。

（3）先用干擾組分的對照品，在測定波長(cháng)λ1和組合波長(cháng)λ2處準確測定吸光度值，求得常數K，然后才能計算出共存組分中干擾組發(fā)b在λ1波長(cháng)處的吸光度值Abλ2。

3 應用實(shí)例

系數倍增法一個(gè)典型應用實(shí)例為收載于日本藥局方中的解熱鎮痛藥阿斯匹林鋁的含量測定，阿斯匹林鋁中因含有分解產(chǎn)物游離子楊酸而干擾其測定。

圖5中的a為純阿斯匹林鋁的光譜曲線(xiàn)，b為水楊酸對照品的光譜曲線(xiàn)，c為含游離子楊酸的阿斯匹林鋁光譜曲線(xiàn)，在阿斯匹林鋁的測定波長(cháng)278nm處水楊酸有干擾，而在水楊酸的zui大吸收波長(cháng)308nm處，阿斯匹林鋁已無(wú)吸收。當用水楊酸對照品測得AS’和AS的比值K后，即可用系數倍增法對含有游離水楊酸的阿斯匹林鋁進(jìn)行含量測定。

三、結語(yǔ)

雙波長(cháng)分光光度法在對共存組分不分離定量測定時(shí)操作簡(jiǎn)便，測定結果準確，在普通分光光度計上均可進(jìn)行測定。目前，雙波長(cháng)分光光度法已在新一代電子計算機控制的分光光度計如普析通用公司TU－1800PC，TU－1901等儀器上被設計為一種的測定如計算程序，使得采用這一分析方法進(jìn)行的測定和計算均可自動(dòng)進(jìn)行，因此，雙波長(cháng)分光光度法解決共存組分不分離定量測定中必將得到廣泛的應用。